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微量DNA產物純化試劑盒說明書
點擊次數:1401 更新時間:2015-05-20

   

微量DNA產物純化試劑盒說明書

 

 

MicroDNA Purification Kit

  目錄號:  YJ0520

 保   存:  室溫

 

 

 組分說明                                        

           

                                        Cat.No.                  YJ0520

                                        KitSize                     50

                                       BufferPB                   30ml

                                       BufferPS                   15ml

                              BufferPW(concentrate)               10ml

                                       BufferEB                   10ml

                                   SpinColumnDS                    50

                               CollectionTube(2ml)                 50

 產品簡介

 

     本試劑盒是專門針對微量PCR產物及一些酶反應液(酶切,連接,探針標記等)而設計的,利用硅基質膜技術,以非常小的終洗脫體積(可少至10μl),從反應液中快速純化50bp-50kb的DNA片段,純化過程中可去除引物、寡核苷酸、酶等雜質,可獲得高純度,高濃度,完整性好的DNA,回收率高達90%。本試劑盒回收的DNA可直接用于測序、連接和轉化、標記、體外轉錄等分子生物學實驗。

 

 注意事項

 

 1.   本試劑盒適用于無選擇性地回收溶液中所有的DNA片段,如需選擇性回收特定片段,同時去除其他不同大小片段,請選擇我公司的膠回收試劑盒(YJ0524,YJ2302,YJ0518或YJ0526)。

 

 2.   *次使用前應按照試劑瓶標簽的說明先在 BufferPW 中加入無水乙醇。

 

 3.   使用前請檢查 BufferPB 是否出現結晶或者沉淀,如有結晶或者沉淀現象,可在 37℃水浴幾分鐘,即可恢復澄清。

 

 4.   回收率與初始DNA量和洗脫體積有關。

 

 5.   所有離心步驟均為使用常規臺式離心機室溫下進行離心。

 

 自備:無水乙醇,離心管  

 

 

操作步驟

 

1.    估計PCR反應液或酶切反應液的體積,加入5倍體積的Buffer PB,充分混勻(如PCR反應體系為50μl,則加入250μlBufferPB,無需去除石蠟油或礦物油)。

 

      注意:在加入BufferPB后檢測溶液的pH值,若pH值大于7.5,可向其中加入10-30 μl 的3M醋酸鈉(pH5.0),從而將pH值調到5-7。

 

2.    柱平衡:向已裝入收集管(CollectionTube)中的吸附柱(SpinColumnDS)中加入200 μl Buffer PS,12,000rpm(~13,400×g)離心2分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

 

3.    將步驟1中所得溶液加入到已裝入收集管的吸附柱中,室溫放置2分鐘,12,000rpm離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱放回收集管中。

 

      注意:吸附柱容積為700μl,若樣品體積大于700μl可分批加入。

 

4.    向吸附柱中加入650 μl Buffer PW(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),12,000rpm離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱放回收集管中。

 

      注意:如果純化的DNA是用于鹽敏感的實驗,例如平末端連接實驗或直接測序,建議加入BufferPW后靜置2-5分鐘再離心。

5.    12,000rpm離心2分鐘,倒掉收集管中的廢液。將吸附柱置于室溫數分鐘,以*晾干。

 

      注意:這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除,乙醇的殘留會影響后續的酶促反應(酶切、PCR等)。為確保下游實驗不受殘留乙醇的影響,建議將吸附柱開蓋,置于室溫放置數分鐘,以*晾干吸附材料中殘余的乙醇。

6.   將吸附柱置于一個新離心管(自備)中,向吸附膜中間位置懸空滴加10-30 μl Buffer EB,室溫放置2分鐘。12,000rpm離心1分鐘,收集DNA溶液。-20℃保存DNA。

 

      注意:1)洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用水做洗脫液,應保證其pH值在7.0-8.5范圍內(可以用NaOH將水的pH值調到此范圍)。 

 

            2)為了提高DNA的回收量,可將離心得到的溶液重新加回吸附柱中,重復步驟6。

 

            3)洗脫體積不應小于10μl,體積過少影響回收效率。

 

            4)如果使用TE洗脫,需要考慮其中含有的EDTA是否會影響后續的酶促反應。

 

            5)回收大于10kb的DNA片段時,BufferEB應在50℃水浴中預熱,適當延長吸附和洗脫時間,可增加回收效率。

 

滬公網安備 31011802001678號

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